雄性沙氏變色蜥（圖／ Ianaré Sévi）

於是美國喬治亞大學的研究團隊挑選變色蜥（Anolis）開發利用CRISPR-Cas9的爬行類模式系統，因為過去半個世紀，變色蜥已是研究爬行類演化、生理、發育的核心模式系統。變色蜥在加勒比海地區經歷過趨異演化，在形態、行為、生理上分化出大量的物種。同時，學者發現了許多趨同演化的例子。因此關於變色蜥的科學文獻異常豐富。

研究人員選擇沙氏變色蜥（Anolis sagrei）做實驗。一般而言，以CRISPR-Cas9更動特定基因座，必須藉顯微注射完成—趁胚胎仍處於單細胞階段時進行，但是對變色蜥受精卵做顯微注射非常困難。

美國喬治亞大學團隊以基因編輯技術生產的白子變色蜥（圖／Prof. Douglas B. Menke）

一來，變色蜥實行體內受精，而且雌性可以把精子長期儲存在輸卵管內，很難掌握注射時機。其次，變色蜥的成熟卵很大（直徑約8 mm），含有大量卵黃，非常脆弱，不容易操弄。最後，卵子受精後便裹上卵殼，不待排出體外胚胎就開始發育，可是變色蜥的卵與鳥卵不同，殼不硬又沒有氣室，不方便對其中的胚胎動手腳。這些困難不是變色蜥特有的，而是許多爬行類的共同特點，因此以變色蜥開發的實驗系統可以應用於其他物種。

研究人員的目標是生產酪胺酸酶的基因tyr，因為許多脊椎動物物種喪失了tyr之後仍然能夠存活。此外，酪胺酸酶調控黑色素的生成，tyr喪失功能後會造成肉眼可以分辨的表現型，例如「白子」。

結果研究人員發現，針對卵巢中未成熟的卵（直徑不超過5 mm）做顯微注射，成功率最高；直徑超過6 mm的，則敬謝不敏。每一隻雌蜥蜴最多有10粒卵子接受顯微注射，合計21隻雌蜥蜴共有146粒卵子接受CRISPR-Cas9注射。卵子受精孵化後，9隻幼蜥至少有一份tyr已喪失功能，其中4隻的表現型是白子—兩份tyr都喪失功能。

參考資料：Introducing the world’s first gene-edited lizard, by H. Murphy, New York Times, April 5, 2019.